彭加平、田锦主编的《基因操作技术(高职高专十二五规划教材)》围绕大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶基因（glyA）的克隆和表达，按照基因工程的操作实际和基本流程，分解为9个项目(27项任务)实施，即基因操作安全及防护→基因操作常用溶液及培养基配制→细菌基因组DNA的制备→PCR扩增目的基因（glyA）→质粒pET30a的小量制备→琼脂糖凝胶电泳检测染色体DNA、PCR产物及质粒pET30a→将glyA克隆至质粒pET30a→将含glyA基因的重组质粒转化至大肠杆菌DH5α→重组子的鉴定及基因表达产物分析。

彭加平、田锦主编的《基因操作技术(高职高专十二五规划教材)》为项目化教学改革配套教材，具体以大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶基因(glyA)的克隆和表达为任务目标，按照基因工程的操作流程将相关知识和技能分解为前后连贯的9个项目、31项任务，涉及的主要内容包括核酸的分离纯化技术、PCR技术、DNA体外重组技术、琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术、分子杂交技术、基因操作安全及防护技术，以及基因操作常用溶液及试剂配制方法等。全书突出技术原理和操作技能的有机融合，深入浅出，图文并茂，便于学生“做中学”和“学中做”，适合项目载体、任务驱动的行动导向教学。

《基因操作技术(高职高专十二五规划教材)》可作为高职高专生物技术及应用、生物制药技术、食品生物技术及相关专业师生的教材，也可供制药、食品企业相关技术人员参考。

项目一基因操作安全及防护

 【学习目标】

※ 项目说明

※ 必备知识

一、基因操作概述

二、基因操作安全及生物安全操作规范

※ 项目实施

任务1.1基因操作常用有毒化学试剂的选择及其防护

任务1.2基因操作常见仪器设备的选择与使用

任务1.3基因操作生物危害废品的处理

 【知识要点】

 【技能要点】

※ 能力拓展

一、实训室用电安全及触电急救

二、实训室火灾预防及烧伤急救

三、实训室标准操作规程的撰写

 【实践练习】

项目二基因操作常用溶液及培养基配制

 【学习目标】

※ 项目说明

※ 必备知识

一、化学试剂的规格和生物试剂的分类

二、溶液浓度的表示、调整和互换

三、溶液的配制

四、生物实验室玻璃器皿的洗涤

※ 项目实施

任务2.1常用溶液和抗生素的配制

任务2.2细菌常用培养基及配制

 【知识要点】

 【技能要点】

※ 能力拓展

一、试剂盒

二、基因操作过程中的微量操作

三、基因操作实训报告的撰写

 【实践练习】

项目三细菌基因组DNA的制备

 【学习目标】

※ 项目说明

※ 必备知识

一、核酸的理化性质

二、核酸的分离提取原理

三、基因的概念、结构与表达

※ 项目实施

任务3.1操作准备

任务3.2SDS法制备细菌基因组DNA

任务3.3CTAB法制备细菌基因组DNA

任务3.4煮沸法制备细菌基因组DNA

 【知识要点】

 【技能要点】

※ 能力拓展

一、动物基因组DNA的提取

二、血液基因组DNA的提取

三、植物基因组DNA的提取

四、酵母基因组DNA的提取

五、总RNA和mRNA的提取

六、核酸固相抽提方法

 【实践练习】

项目四PCR扩增目的基因——大肠杆菌

丝氨酸羟甲基转移酶基因（glyA）

 【学习目标】

※ 项目说明

※ 必备知识

一、PCR扩增原理

二、Taq聚合酶

三、PCR引物设计原则

四、PCR反应体系的组成及条件优化

五、常用PCR技术

六、PCR技术应用81※ 项目实施

任务4.1操作准备

任务4.2基于glyA基因的引物设计

任务4.3PCR扩增glyA基因

 【知识要点】

 【技能要点】

※ 能力拓展

一、常见生物信息数据库（软件）介绍及使用

二、构建基因文库获得目的基因

三、用反转录PCR扩增目的DNA

 【实践练习】

项目五质粒PET30a的小量制备

 【学习目标】

※ 项目说明

※ 必备知识

一、质粒的一般特性

二、质粒的分类和命名

三、理想质粒载体的必备条件

四、常用的质粒载体98※ 项目实施

任务5.1操作准备

任务5.2用碱裂解法小量制备质粒pET30a

任务5.3用紫外分光光度法测定pET30a的浓度和纯度

任务5.4质粒pET30a的纯化

 【知识要点】

 【技能要点】

※ 能力拓展

一、表达载体

二、阅读质粒载体图谱

 【实践练习】

项目六琼脂糖凝胶电泳检测染色体DNA、

PCR产物及质粒pET30a

 【学习目标】

※ 项目说明

※ 必备知识

一、琼脂糖凝胶电泳的基本原理

二、影响琼脂糖凝胶DNA迁移速率的因素

※ 项目实施

任务6.1操作准备

任务6.2琼脂糖凝胶电泳检测染色体DNA、PCR产物及质粒pET30a

任务6.3从低熔点琼脂糖凝胶中回收质粒pET30a

 【知识要点】

 【技能要点】

※ 能力拓展

一、琼脂糖凝胶电泳带谱的拍摄及处理技术

二、随机扩增多态性DNA（RAPD）

 【实践练习】

项目七重组质粒的制备将丝氨酸羟甲基转

移酶基因（glyA）克隆至质粒pET30a

 【学习目标】

※ 项目说明

※ 必备知识

一、限制性核酸内切酶

二、DNA连接酶

三、DNA甲基化酶

四、其他工具酶

※ 项目实施

任务7.1操作准备

任务7.2用BamHⅠ和NdeⅠ酶切PCR产物（glyA）和质粒pET30a

任务7.3用T DNA连接酶将glyA和pET30a连接形成重组质粒

 【知识要点】

 【技能要点】

※ 能力拓展

一、酵母表达系统

二、限制性片段长度多态性（RFLP）

 【实践练习】

项目八将含glyA基因的重组质粒

转化至大肠杆菌DH5α

 【学习目标】

※ 项目说明

※ 必备知识

一、感受态

二、转化

三、重组子的筛选

※ 项目实施

任务8.1操作准备

任务8.2大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备

任务8.3用热激法将含glyA的重组质粒转化至大肠杆菌DH5α

任务8.4用电击法将含glyA的重组质粒转化至大肠杆菌DH5α

 【知识要点】

 【技能要点】

※ 能力拓展

一、基因打靶技术

二、转基因技术

三、农杆菌介导转化技术

 【实践练习】

项目九重组子的鉴定及基因表达产物分析

 【学习目标】

※ 项目说明

※ 必备知识

一、聚丙烯酰胺凝胶电泳

二、SDS.聚丙烯酰胺凝胶电泳

三、核酸分子杂交

※ 项目实施

任务9.1操作准备

任务9.2重组质粒的酶切鉴定

任务9.3重组质粒的Southern印迹杂交鉴定

任务9.4目的基因（glyA）的诱导表达

任务9.5表达产物的SDS.PAGE分析

 【知识要点】

 【技能要点】

※ 能力拓展

一、等电聚焦电泳

二、DNA芯片技术

 【实践练习】

参考文献